細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學試驗中，其應用越來越廣泛。

　　影響細胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些？

　　1.轉(zhuǎn)染試劑的選擇

　　不同細胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要，因此在轉(zhuǎn)染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。

　　每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選擇適合實驗設計的轉(zhuǎn)染試劑。當然，適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉(zhuǎn)染試劑。

　　2.細胞狀態(tài)

　　一般低的細胞代數(shù)（<50）能確保基因型不變。適合轉(zhuǎn)染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到指數(shù)生長期的細胞，細胞生長旺盛，最容易轉(zhuǎn)染。

　　細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變，總染色體重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會導致和轉(zhuǎn)染相關的細胞行為的變化。也就是說同一種系的細胞株，在各實驗室不同培養(yǎng)條件下，其生物學性狀發(fā)生不同程度的改變，導致其轉(zhuǎn)染特性也發(fā)生變化。

　　因此，如果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復結果。

　　3.轉(zhuǎn)染方法

　　轉(zhuǎn)染時應根據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法進行，但也要根據(jù)實驗室的條件來確定轉(zhuǎn)染條件。

　　（1）細胞培養(yǎng)物

　　推薦在轉(zhuǎn)染前24小時分細胞，這將提供正常細胞代謝，增加對外源DNA攝入的可能。一定要避免細菌，支原體或真菌的污染。

　　（2）細胞密度

　　細胞密度對轉(zhuǎn)染效率有一定的影響。如果選用新的細胞系或者新的轉(zhuǎn)染試劑，最好能夠進行優(yōu)化實驗并為以后的實驗建立一個穩(wěn)定方法，包括適當?shù)慕臃N量和培養(yǎng)時間等等。

　?。?）血清

　　對于主流的轉(zhuǎn)染試劑來說，血清的存在不會影響轉(zhuǎn)染效率，甚至還有助于提高轉(zhuǎn)染效率。

　　不過要特別注意：對于RNA轉(zhuǎn)染，如何消除血清中潛在的RNase污染是值得關注的。

　　胎牛血清經(jīng)常用到，便宜一點的有馬或牛血清。通常的，血清是一種包含生長因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物，對不同細胞的生長作用有很大的差別。血清質(zhì)量的變化直接影響細胞生長，因此也會影響轉(zhuǎn)染效率。新加培養(yǎng)基的預熱對細胞轉(zhuǎn)染很有幫助。

　　（4）氮磷（N/P）比

　　N/P比是轉(zhuǎn)染效率的關鍵（為了換算方便，一般以DNA/轉(zhuǎn)染試劑質(zhì)量比表示），在一定比例范圍內(nèi)轉(zhuǎn)染效率隨N/P比成比例增高，之后達到平值，但毒性也隨之而增加，因此在實驗之前應根據(jù)推薦比例，確定本實驗的最佳轉(zhuǎn)染比例。

　　（5）DNA質(zhì)量

　　DNA質(zhì)量對轉(zhuǎn)染效率影響非常大。應盡可能提高DNA的純度。